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分子生物學系列產品

總RNA提取試劑

總RNA提取試劑

貨號:
M5100
規格:
100ml
目錄價:
¥499.00
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 產品介紹

    NcmZol Reagent 適用于快速、直接從多種組織和細胞中提取總RNA的一種廣譜型試劑。NcmZol Reagent內含優化的異硫氰酸胍、酸性酚等物質,能迅速破碎細胞,抑制細胞釋放出的核酸酶,最大限度地裂解樣品且同時保證RNA的完整性。加入氯仿離心后,溶液會分成三層:上層無色水相、中間層和下層紅色有機相,其中RNA分布在上清無色水相中。本試劑操作快速方便,顏色分明,提取的總RNA完整性好,純度高,無蛋白和DNA的污染,可用于各種分子生物學實驗,如RT-PCR、Real-time PCR、Dot Blot、Northern等。

 產品特色

使用范圍廣:對人、動物、植物和細菌組織提取均適用

操作快速:一個小時內可完成純化步驟

顏色分明:溶液呈粉紅色,便于分離水相和有機相

提取純度高:DNA和蛋白質污染最低,可用于多種下游實驗

產量高:最大程度地獲得樣品中的RNA

 操作步驟

準備試劑(自備):異丙醇、氯仿、75%乙醇(用DEPC處理的雙蒸水配制)、無RNase的水。

1. 各種材料樣本的勻漿處理

a)貼壁培養的細胞:吸去培養基,用PBS清洗一次,在培養板中直接加入適量的NcmZol Reagent(每10cm2生長的培養細胞中加入1ml的Ncmzol Reagent),水平放置片刻,便于裂解液均勻分布細胞表面裂解,再使用移液器吹打細胞并移至收集管中。

注意:1)收集細胞數量不要超過1X107/ml NcmZol Reagent;

2)NcmZol Reagent加入量根據培養板面積確定,若是NcmZol Reagent加入量不足,可能導致提取的RNA中有DNA污染。

b)懸浮培養細胞:將懸浮培養的細胞和培養基一起倒入離心管中,離心收集細胞,每5X106-1X107動植物、酵母或細菌細胞加入1ml NcmZol Reagent。

注意:1)部分酵母和細菌細胞可能需要勻漿儀或液氮研磨處理;

2)加入NcmZol Reagent前不要洗滌細胞,以免RNA降解。

c)動物、植物組織:取新鮮或-70℃冷凍的動植物組織在液氮中充分減碎研磨,將研磨成粉狀的樣品轉移至離心管中,每20-50mg組織加入1ml NcmZol Reagent,勻漿儀進行勻漿處理。

注意:1)要在液氮等低溫下處理樣品組織,避免RNA降解;

2)樣品體積一般不要超過NcmZol Reagent體積的10%。

2. 樣品在加入NcmZol Reagent 后用移液器反復吹打幾次,直至裂解液中無明顯沉淀,使樣品充分裂解。室溫靜置5分鐘,使得蛋白質核酸復合物完全分離。

3. 向上述溶液中加入氯仿,每使用1ml NcmZol Reagent加入0.2ml氯仿,劇烈振蕩15秒,室溫靜置5分鐘。

4. 12,000g, 4℃離心15分鐘,此時樣品會分為三層:紅色有機相、中間層和上層無色水相。其中RNA主要在水相中,將水相(約500ul)轉移至一個新的RNase-Free的離心管中。

5. 在得到的無色水相的離心管中,每使用1ml NcmZol Reagent 加入0.5ml異丙醇(等體積的異丙醇),顛倒混勻,室溫靜置10分鐘。

6. 12,000g, 4℃離心10分鐘,棄去上清,在管壁和管底形成膠狀沉淀,即RNA。

7. 加1ml 75%乙醇(用DEPC處理的雙蒸水配制)洗滌沉淀,每使用1ml NcmZol Reagent 用1ml 75%乙醇,然后8,000g, 4℃離心5分鐘。

8. 棄去上清(為了獲得更純的RNA,應盡量除盡乙醇),室溫晾干沉淀(大約5分鐘左右)。

9. 加入20-50ul的無RNase的水,充分溶解RNA,樣品保存于-70℃以備長期使用。

                                       操作示意圖

 image.png

 保存條件

4℃保存,室溫運輸,2年有效;

 注意事項

1. 預防RNase污染,降解RNA,如:使用無RNase的塑料制品和槍頭,操作時要戴一次性口罩和手套,實驗過程中要勤換手套。

2. 加入氯仿后,一定要充分振蕩,保證RNA提取的效果

3. 使用的樣本避免反復凍融,以免影響RNA的產率和質量。

4. NcmZol Reagent含有苯酚,具有毒性和腐蝕性,使用本制品時要穿戴防護物品,避免吸入體內、接觸皮膚、吞食等現象發生。如果不小心發生,應立即用大量的水沖洗并前往醫院治療。


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