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蛋白/免疫學系列產品

Western及IP細胞裂解液

Western及IP細胞裂解液

貨號:
P70100
規格:
100ml
目錄價:
¥120.00
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產品介紹

新賽美生物生產的 Western IP 細胞裂解液 (Cell Lysis Buffer for Western and IP without Inhibitors),是一種在非變 性條件下裂解細胞的裂解液。本細胞裂解液可以有效地裂解細胞蛋白,同時不會釋放出基因組 DNA 等物質,亦 不會破壞蛋白的結構,處理好的樣品可以用于 PAGE,Western,免疫沉淀(Immunol precipitation,IP),免疫共沉淀 (Co-IP),以及許多兼容 1%NP-40 的酶活性或者生物小分子的檢測。本細胞裂解液的主要成分為 25mM TrisHcl(pH7.4),150mM NaCl,1% NP-40 5%glycerol 等,可有效抑制蛋白的降解,并維持原有的蛋白間相互作用。

操作步驟

 對于培養細胞樣品(僅供參考)

1. 取適當量的 Western IP 細胞裂解液,在使用前數分鐘內加入 PMSF,使 PMSF 的最終濃度為 1mM。 注意: Western IP 細胞裂解液不含蛋白酶等抑制劑,根據需要在使用前添加蛋白酶,磷酸酶等抑制劑。 

2.對于貼壁細胞:去除培養液,用 PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍(如果血清中的蛋白沒有干擾,可以不洗)。 按照 6 孔板每孔加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數下,使裂解液和細胞充分接觸。通常裂 解液接觸細胞 1-2 秒后,細胞就會被裂解。 對于懸浮細胞:離心收集細胞,用手指把細胞用力彈散。按照 6 孔板每孔細胞加入 150-250 微升裂解液的比例加 入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多,必需分裝成 50- 100 萬細胞/管,然后再裂解。 

對于組織樣品: 

1. 把組織剪切成細小的碎片。 

2. 取適當量的 Western IP 細胞裂解液,在使用前數分鐘內加入 PMSF,使 PMSF 的最終濃度為 1mM。 

3. 按照每 20 毫克組織加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解 液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當減少裂解液的用量

 4. 用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。 

5. 充分裂解后,10000-14000g 離心 3-5 分鐘,取上清,即可進行后續的 PAGE、Western 和免疫沉淀等操作。 

6. 如果組織樣品本身非常細小,可以適當剪切后直接加入裂解液裂解,通過強烈渦旋使樣品裂解充分。然后同樣 離心取上清,用于后續實驗。直接裂解的優點是比較方便,不必使用勻漿器,缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得 比較充分。 

注意事項:

1. 為取得最佳的使用效果,盡量避免過多的反復凍融, 可以適當分裝后使用。 

2. 本裂解液不含有抑制劑,根據實驗的需要,加入相應的蛋白酶或磷酸酶抑制劑。 

3. 裂解樣品的所有步驟都需在冰上或 4℃進行。

4. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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