產品介紹
新賽美生物生產的 Western 及 IP 細胞裂解液 (Cell Lysis Buffer for Western and IP without Inhibitors)，是一種在非變 性條件下裂解細胞的裂解液。本細胞裂解液可以有效地裂解細胞蛋白，同時不會釋放出基因組 DNA 等物質，亦 不會破壞蛋白的結構，處理好的樣品可以用于 PAGE，Western，免疫沉淀(Immunol precipitation，IP)，免疫共沉淀 (Co-IP)，以及許多兼容 1%NP-40 的酶活性或者生物小分子的檢測。本細胞裂解液的主要成分為 25mM TrisHcl(pH7.4)，150mM NaCl，1% NP-40 和 5%的 glycerol 等，可有效抑制蛋白的降解，并維持原有的蛋白間相互作用。
操作步驟
對于培養細胞樣品（僅供參考）
1. 取適當量的 Western 及 IP 細胞裂解液，在使用前數分鐘內加入 PMSF，使 PMSF 的最終濃度為 1mM。 注意： Western 及 IP 細胞裂解液不含蛋白酶等抑制劑，根據需要在使用前添加蛋白酶，磷酸酶等抑制劑。
2.對于貼壁細胞：去除培養液，用 PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍(如果血清中的蛋白沒有干擾，可以不洗)。 按照 6 孔板每孔加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數下，使裂解液和細胞充分接觸。通常裂 解液接觸細胞 1-2 秒后，細胞就會被裂解。 對于懸浮細胞：離心收集細胞，用手指把細胞用力彈散。按照 6 孔板每孔細胞加入 150-250 微升裂解液的比例加 入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多，必需分裝成 50- 100 萬細胞/管，然后再裂解。
對于組織樣品：
1. 把組織剪切成細小的碎片。
2. 取適當量的 Western 及 IP 細胞裂解液，在使用前數分鐘內加入 PMSF，使 PMSF 的最終濃度為 1mM。
3. 按照每 20 毫克組織加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解 液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當減少裂解液的用量)
4. 用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。
5. 充分裂解后，10000-14000g 離心 3-5 分鐘，取上清，即可進行后續的 PAGE、Western 和免疫沉淀等操作。
6. 如果組織樣品本身非常細小，可以適當剪切后直接加入裂解液裂解，通過強烈渦旋使樣品裂解充分。然后同樣 離心取上清，用于后續實驗。直接裂解的優點是比較方便，不必使用勻漿器，缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得 比較充分。
注意事項：
1. 為取得最佳的使用效果，盡量避免過多的反復凍融, 可以適當分裝后使用。
2. 本裂解液不含有抑制劑，根據實驗的需要，加入相應的蛋白酶或磷酸酶抑制劑。
3. 裂解樣品的所有步驟都需在冰上或 4℃進行。
4. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
