產品介紹
Bradford 蛋白定量法是最簡單和快速的蛋白定量方法之一,可實現對濃度范圍在 10-1000ug/ml 的蛋白質溶液經行定量。該定量的原理是考馬斯藍染料與蛋白質結合后,溶液的 顏色發生變化(棕色變成藍色),結合物顏色的深淺與蛋白濃度的高低成正比關系,因而可通過 檢測 595nm 的最大光吸收值的大小來計算蛋白的含量。本試劑盒可對含有還原劑的樣品經行測 定,但對于含有表面活性劑的樣品的測定結果不穩定。
操作步驟
1.稀釋 BSA 標準品:用與待測蛋白樣品一致的稀釋液按下表稀釋 BSA 標準品。
2. 將按表 1 稀釋好的 A-G BSA 標準品和待測蛋白樣品(原液或稀釋液)各 5ul 分別加到作好標 記的 96 孔微孔板中。
3. 每孔中加入 200ul Bradford Dye Solution,充分混勻,蓋上 96 孔板蓋,室溫放置 3-5 分鐘。
注:Bradford Dye Solution 長時間放置可能會有沉淀產生,使用前晃動試劑瓶,使其重新混勻 即可。
4. 酶標儀波長設定在 595nm 處經行吸光值測定(測定時間盡量控制在反應后的 1 小時以內)。
5. 各濃度的BSA 標準品溶液的吸光值減去 Blank 值的平均值,繪制BSA 標準品溶液的標準曲線, 并根據 BSA 標準曲線計算出相應的檢測樣品的蛋白質濃度。
6. 如果所得到的蛋白質濃度不在檢測范圍內,請重新稀釋樣品后再次進行測定。
保存條件
注意事項
1. 本產品可以采用分光光度計或酶標儀測定蛋白濃度
2. 建議每次測定蛋白樣品時,繪制標準曲線,獲得更準確數據
3. BSA 標準品稀釋液需和待測樣品的稀釋液一致
4. 建議去除背景值后的吸光度值讀數繪制標準曲線,由于操作誤差導致標準品讀數嚴重偏離 線性曲線的應舍去。
5. 如果得到的蛋白濃度不在檢測范圍內,請重新稀釋樣品后再次測定。