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      您好,歡迎來到新賽美
      分子生物學系列產品

      總RNA柱式提取試劑盒

      總RNA柱式提取試劑盒

      貨號:
      M050
      規格:
      50次
      目錄價:
      ¥699.00
      購買數量
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      產品介紹 

      RNAExpress Total RNA Kit 是新賽美生物研發的新一代快速高效的總 RNA 提取試劑盒,提高了裂解液的效果和 增強了提取的靈敏度。通過對產品的多重優化,最快能在 10 分鐘之內得到純度更好,質量更高的總 RNA, 不含有基因組 DNA 和蛋白質的污染。同時對硅基質膜的改進增強了對 RNA 的吸附能力,每個吸附柱可處理 高達 50mg 組織,或 5X106細胞。在優化的試劑中加入了 RNA 保護劑,防止 RNA 在操作過程中發生降解,即 使在室溫條件下也可以完成。提取的總 RNA 可用于 Northern Blot,Dot Blot,PolyA 篩選,體外翻譯,RNase 保護分析和分子克隆。

      產品特色 

      ? 操作快速:最快 10 分鐘即可獲得高質量的總 RNA ? 提取純度高:不含基因組 DNA 污染,不需 DnaseI 酶處理 ? 產量高:最大程度地獲得樣品中的 RNA ? 室溫條件下完成總 RNA 提取 

      產品組成 組成成分 50 Preps RNAExpress Lysis Buffer1 50 ml 漂洗液 RWB2(RNase-Free) 10ml (另外添加 40ml 無水乙醇) 洗脫液 REB3(RNase-Free) 3 ml 離心吸附柱(NcmSpin Column, Rase-Free)含收集管 50 個 1.RNAExpress Lysis Buffer 4 ℃避光保存,其他溶劑及吸附柱室溫保存。 2.在漂洗液 RWB 中加入指定量的無水乙醇(分析純),在試劑瓶上標注出,使用完畢后要擰緊試劑瓶,防止乙醇揮發。 3.洗脫緩沖液 REB 中不含有 EDTA,一般情況不影響下游實驗。

      操作步驟

      準備試劑(自備):氯仿、無水乙醇等 1. 各種材料樣本的勻漿處理 (a)貼壁培養的細胞:吸去培養基,在培養板中直接加入適量的 RNAExpress Lysis Buffer(每 10cm2生長的培 養細胞中加入 1ml 的 RNAExpress Lysis Buffer),水平放置片刻,便于裂解液均勻分布細胞表面裂解,再使用移 液器吹打細胞并移至收集管中。 注意:(1)收集細胞數量不要超過 5X106 /ml RNAExpress Lysis Buffer; (2)RNAExpress Lysis Buffer 加入量根據培養板面積確定,若是 RNAExpress Lysis Buffer 加入量不足, 可能導致提取的 RNA 中有 DNA 污染。 (b)懸浮培養細胞:將懸浮培養的細胞和培養基一起倒入離心管中,離心收集細胞,每 5X106動植物、酵母或細 菌細胞加入 RNAExpress Lysis Buffer。 注意:(1)部分酵母和細菌細胞可能需要勻漿儀或液氮研磨處理;或者需要使用溶菌酶進行裂解處理。 (2)加入 RNAExpress Lysis Buffer 前不要洗滌細胞,以免 RNA 降解。 新賽美生物科技有限公司 www.qartuli.net 電話:0512-66378926 郵箱:xinsaimei@ncmbio.com 僅用于科學研究 (c)動物、植物組織:取新鮮或-70℃冷凍的動植物組織在液氮中充分剪碎研磨,將研磨成粉狀的樣品轉移至離 心管中,每 20-50mg 組織加入 1ml RNAExpress Lysis Buffer,勻漿儀進行勻漿處理。 注意:(1)要在液氮等低溫下處理樣品組織,避免 RNA 降解; (2)樣品體積一般不要超過 RNAExpress Lysis Buffer 體積的 10%。 2. 樣品在加入 RNAExpress Lysis Buffer 后用移液器反復吹打幾次,直至裂解液中無明顯沉淀,使樣品充分裂 解。室溫靜置 5 分鐘,使得蛋白質核酸復合物完全分離。 注意可選步驟 4-25℃,12,000rpm 離心 5 min,取上清,轉入一個新的無 RNase 的離心管中。(如果樣品中含有 較多蛋白、脂肪、多糖或肌肉、植物結節部分等,可加此步驟離心去除。離心得到的沉淀中包括細胞外膜、多糖、 高分子量 DNA,RNA 存在于上清溶液) 3. 向上述溶液中加入氯仿,每使用 1ml RNAExpress Lysis Buffer 加入 0.2ml 氯仿,劇烈振蕩 15 秒。 4. 12,000rpm, 4-25℃離心 1 分鐘,此時樣品會分為三層:紅色有機相、中間層和上層無色水相。其中 RNA 主要 在水相中,將水相(約 500ul)轉移至一個新的 RNase-Free 的離心管中。 5. 在得到的無色水相的離心管中,加入等體積的無水乙醇,混勻。將得到溶液轉入吸附柱NcmSpin Column中,4-25℃ 12,000 rpm 離心 30sec, 若一次不能將全部溶液和混合物加入吸附柱 NcmSpin Column, 請分兩次轉入吸附柱 NcmSpin Column 中,4-25℃,12,000rpm 離心 30sec,棄掉收集管中的廢液。 6.向吸附柱 NcmSpin Column 中加入 500μl 漂洗液 RWB(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇),12,000 rpm 離 心 30sec,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱 NcmSpin Column 放入收集管中。 7. 重復操作步驟 6。 8. 將吸附柱 NcmSpin Column 放入收集管中,12,000rpm 離心 2min,盡量除去漂洗液。將吸附柱置于室溫放置 2 分鐘,徹底晾干 注意:此步驟目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除,如果有漂洗液殘留,可能會影響后續的 RT-PCR 等實驗操作。 9. 加入 30-50ul 的洗脫液 REB 或者 RNase-Free dd2HO,室溫靜置 2 分鐘,4-25℃,12,000rpm 離心 1 分鐘。樣品 保存于-70℃以備長期使用。

      保存條件

      室溫運輸,RNAExpress Lysis Buffer 4 ℃避光保存(單獨包裝),其他溶劑及吸附柱室溫保存,2 年有效。 

      注意事項

      1. 預防 RNase 污染,如:使用無 RNase 的塑料制品和槍頭,操作時要戴一次性口罩和手套,實驗過程中要勤換手套。 2. 加入氯仿后,一定要充分振蕩,保證 RNA 提取的效果 3. 使用的樣本避免反復凍融,以免影響 RNA 的產率和質量。 4. RNAExpress Lysis Buffer 含有苯酚,具有毒性和腐蝕性,使用本制品時要穿戴防護物品,避免吸入體內、接觸皮膚、吞 食等現象發生。如果不小心發生,應立即用大量的水沖洗并前往醫院治療。

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