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      您好,歡迎來到新賽美
      蛋白/免疫學系列產品

      RIPA裂解液

      RIPA裂解液

      貨號:
      WB3100
      規格:
      100ml
      目錄價:
      ¥199.00
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      產品介紹 

      RIPA Radio Immunoprecipitation Assay,是一種傳統的細胞組織快速裂解液。新賽美生物的 RIPA 裂解液裂解所得的蛋白樣品可以用于常規的 Western、IP 等。主要成分是:50mMTris(pH 7.6),150mM  NaCl,1% NP-40,0.5% sodiumdeoxycholate,0.1% SDS 等多種裂解劑和抑制劑,能有效地抑制蛋白 降解。 

      操作步驟 

      對于培養細胞樣品: 

      1. 取適當量的NCM RIPA Buffer 裂解液,在使用前數分鐘內加入PMSF,使PMSF的最終濃度為1mM。 

      注意:NCM RIPA Buffer 不含蛋白酶等抑制劑,根據需要在使用前添加蛋白酶,磷酸酶等抑制劑。 2. a.對于貼壁細胞:去除培養液,用 PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍(如果血清中的蛋白沒有 干擾,可以不洗)。按照 6 孔板每孔加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數下,使 裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞 1-2 秒后,細胞就會被裂解。 b. 對于懸浮細胞:離心收集細胞,用手指把細胞用力彈散。按照 6 孔板每孔細胞加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。 如果細胞量較多,必需分裝成 50-100 萬細胞/管,然后再裂解。 

      對于組織樣品:

      1. 把組織剪切成細小的碎片。 2. 融解 RIPA 裂解液,混勻。取適當量的裂解液,在使用前數分鐘內加入 PMSF,使 PMSF 的最終濃 度為 1mM。 3. 按照每 20 毫克組織加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當添加 更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當減少裂解液的用量)  4. 用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。 5. 充分裂解后,10000-14000g 離心 3-5 分鐘,取上清,即可進行后續的 PAGE、Western 和免疫沉淀 等操作。 6. 如果組織樣品本身非常細小,可以適當剪切后直接加入裂解液裂解,通過強烈渦旋使樣品裂解 充分。然后同樣離心取上清,用于后續實驗。直接裂解的優點是比較方便,不必使用勻漿器,缺點 是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。

      保存條件 

      4℃保存,室溫運輸,2 年有效;

      注意事項:

      1.RIPA 裂解液的裂解產物中經常會出現一小團透明膠狀物,屬正?,F象。該透明膠狀物為含有基因 組 DNA 等的復合物。在不檢測和基因組 DNA 結合特別緊密的蛋白的情況下,可以直接離心取上清 用于后續實驗;如果需要檢測和基因組結合特別緊密的蛋白,則可以通過超聲處理打碎打散該透明 膠狀物,隨后離心取上清用于后續實驗。如果檢測一些常見的轉錄因子,例如 NFκB、p53 等時,通 常不必進行超聲處理,就可以檢測到這些轉錄因子。 2.為獲得最佳的實驗效果,可適當分裝使用,以盡量避免反復凍融。 3PMSF 應現用現加,需自備 PMSF。  4.裂解蛋白的所有步驟都需在冰上或 4℃進行。 5.蛋白酶抑制劑均有較高的毒性,為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。一旦 直接接觸,請立即用流水沖洗,再向醫療保健結構咨詢。

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