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蛋白/免疫學系列產品

蛋白裂解及上樣緩沖液(1X,還原性)

蛋白裂解及上樣緩沖液(1X,還原性)

貨號:
WB2040
規格:
4X 10ml
目錄價:
¥249.00
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產品介紹 

新賽美生物生產的蛋白裂解及上樣緩沖液(ProtLytic Protein Lysis and Sample Loading,1X),是一種經過改良的以溴酚藍為染料 的可直接裂解蛋白且直接上樣的緩沖液??梢灾苯佑糜诩毎蚪M織樣品的裂解,并用于后續常規的 SDS-PAGE 蛋白樣品的上樣。 直接裂解蛋白樣品的優點是比較便捷;缺點是裂解好的蛋白樣品不能用常規的 Bradford 法或 BCA 法測定蛋白濃度。這樣蛋白 上樣量的均一性就較難控制,需要借助考馬斯亮藍等的染色結果或 Western 的檢測結果,來調整上樣量。該產品是還原性的, 加入了 TCEP 的還原劑,替代了傳統的 DTT 2-ME,還原劑 TCEP 無難聞氣味,穩定性更高,還原效果更佳 。

操作步驟

1. 取適當量的蛋白裂解及上樣緩沖液,在使用前數分鐘內加入 PMSF,使 PMSF 的最終濃度為 1mM。 

注意:該產品不含蛋白酶等抑制劑,根據需要在使用前添加蛋白酶,磷酸酶等抑制劑(蛋白酶抑制劑混合液,貨號:P001)。 

2.對于貼壁細胞:去除培養液,用 PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍(如果血清中的蛋白沒有干擾,可以不洗)。按照 6 孔板每孔 加入 150-250 微升比例加入裂解液。用槍吹打數下,使裂解液和細胞充分接觸。 

3. 對于懸浮細胞:離心收集細胞,將細胞用力彈散。按照 6 孔板每孔細胞加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕 彈以充分裂解細胞。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多,必需分裝成 50-100 萬細胞/管,然后再裂解。 對于組織樣品: (a). 把組織剪切成細小的碎片。 (b) 按照每 20 毫克組織加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液,如果需要高濃度 的蛋白樣品,可以適當減少裂解液的用量)  (c) 用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。充分裂解后,將樣品收集到一潔凈離心管中。

4. 100℃或沸水浴加熱 5-10 分鐘,以充分變性蛋白。 

注意:煮沸前通常會發現蛋白樣品內有粘稠的半透明狀物體,通常在本上樣緩沖液內沸水浴煮沸 8-10 分鐘后可以確保該粘稠的 半透明狀物體消失,以便于后續的上樣操作。 

5.冷卻到室溫后,室溫稍離心一下以沉淀可能出現的雜質等,上清即可直接上樣到 SDS-PAGE 膠加樣孔內即可。通常電泳至藍色染料 到達膠的底端處附近即可停止電泳。 

注意事項:

1. 裂解液的裂解產物中經常會出現一小團膠狀物,屬正?,F象。

2.為獲得最佳的實驗效果,可適當分裝使用,以盡量避免反復凍融。

3PMSF 應現用現加,需自備 PMSF。

4.裂解蛋白的所有步驟都需在冰上或 4℃進行。

5.蛋白酶抑制劑均有較高的毒性,為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。一旦直接接觸,請立即用流水沖洗, 再向醫療保健結構咨詢

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